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檢測依據(jù):2020年版《中國藥典》四部 通則 1106
用于能在有氧條件下生長的嗜溫細菌和真菌的計數(shù)。
• 用于檢查非無菌制劑及無菌制劑及其原、輔料的等是否符合規(guī)定的微生物限度標準
• 除另有規(guī)定外,本法不適用于活菌制劑的檢查。
供試品微生物計數(shù)所使用的的培養(yǎng)基應進行適用性檢查;
供試品的微生物計數(shù)方法應進行方法適用性試驗,包括需氧菌總數(shù)計數(shù)、霉菌和酵母菌總數(shù)計數(shù),以確認所采用的方法適合于該產(chǎn)品的微生物的微生物計數(shù)。
試驗菌種:
l 金黃色葡萄球菌 [Staphylococcus aureus CMCC(B) 26003]
l 銅綠假單胞菌[Pseudomonas aeruginosa CMCC(B) 10104]
l 枯草芽孢桿菌[Bacillus subtilis CMCC(B) 63501]
l 白色念珠菌[Candida albicans CMCC(F) 98001]
l 黑曲霉[Aspergillus niger CMCC(F) 98003]
按表1規(guī)定,接種不大于100cfu的菌液至胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基(TSB)管或胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基平板(TSA)或沙氏葡萄糖瓊脂平板(SDA),置表1規(guī)定條件下培養(yǎng)。每一試驗菌株平行制備2管或2個平板。同時,用相應的對照培養(yǎng)基替代被檢培
養(yǎng)基進行上述試驗。
被檢固體培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)與對照培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)的比值應在0.5~2范圍內(nèi),且菌落形態(tài)大小應與對照培養(yǎng)基的菌落一致;被檢液體培養(yǎng)基管與對照培養(yǎng)基管比較,試驗菌應生長良好。
陰性對照 應無菌生長,如有菌生長,應進行偏差調(diào)查。
計數(shù)方法適用性檢查
1、供試液制備
根據(jù)供試品的理化特性與生物學特性,采取適宜的方法制備供試液。供試液制備若需加溫時,應均勻加熱,且溫度不應超過45℃。供試液從制備至加入檢驗用培養(yǎng)基,不得超過1小時。
水溶性供試品
• 取供試品,用pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液,或pH7.2磷酸鹽緩沖液,或胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基,溶解或稀釋制成1:10供試液。
• 若需要,調(diào)節(jié)pH值至6~8。
• 必要時用同一稀釋液將供試液進一步10倍系列稀釋。水溶性液體制劑也可用混合的的供試品原液作為供試液。
常見供試品制備方法
水不溶性非油脂類供試品
油脂類供試品
膜劑類供試品
腸溶及結腸溶制劑供試品
氣霧劑供試品
貼劑、貼膏劑供試品
• 如果經(jīng)確認均不適用,應建立其他適宜的方法。
2、接種和稀釋
• 按表2規(guī)定及下列要求進行供試液的接種和稀釋,制備微生物回收試驗用供試液。
• 所加菌液的體積應不超過供試液體積的1%。
• 為確認供試品中的微生物能被充分檢查,首先應選擇至低稀釋級的供試液進行計
數(shù)方法適用性檢查。
試驗組:取制備好的供試液,加入試驗菌液,混勻,是1ml供試液或每張濾膜所濾過的供試液中含菌量不大于100cfu。
供試品對照組: 取制備好的供試液,以稀釋液代替菌液同試驗組操作
菌液對照組 :取不含中和劑及滅活劑的相應稀釋液替代供試液,按試驗組操作加入試驗菌液并進行微生物回收試驗。
如果供試品對微生物生長的抑制無法以其他方法消除,供試液可經(jīng)過中和、稀釋或薄膜過濾處理后再加入試驗菌懸液進行方法適用性試驗。
3、抗菌活性的去除或滅活
若試驗組菌落數(shù)-供試品對照組菌落數(shù)<菌液對照組菌落數(shù)值的50%,可采用下述方法
• 增加稀釋液或培養(yǎng)基體積
• 加入適宜的中和劑或滅活劑
• 采用薄膜過濾法
• 上述幾種方法的聯(lián)合使用
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